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光度计的校准方法

发布时间:2020-11-16

微量分光光度计的校准方法 微量分光光度计的呈现解决了微量样品选用分光法定性及定量测验的问题。基于此特色,该类仪器被广泛用于生物、医学等检测样本量稀疏而且价格贵重的范畴。微量分光光度计属于分光光度计类测验仪器,遵循朗伯比尔规律,但较一般的分光光度计还是有很大的改善。随着仪器运用量的增多,不得不考虑该类仪器的溯源性问题。2015 年相关部门提出并计划编制该类仪器的校准规范,但至今还未出版正式的国家校准规范。针对微量分光光度计的测验原理和功用特色,分别对两种校准方法进行了探讨,并提出了建议。 1 微量分光光度计的测验原理及功用特色 微量分光光度计的共同之处在于它对测验样品量的要求非常低,现有的仪器中可测量最低为 0.3 μL的样品,能够节约非常稀疏且贵重的样品量。检测波长规模 200 ~ 1 000 nm,大都仪器设定了定点测验波长 230 nm、260 nm 和 280 nm,便于 DNA、RNA 和蛋白质的测验。选用发光安稳且不需预热的氙灯替代钨灯和氘灯作为光源,寿命更长,光强更大。该类仪器中精度稍高的都在运用电感耦合阵列检测器(CCD),其光谱规模、量子效率、信噪比等指标都远高于光电二极管阵列。 运用该类仪器多用其基座检测模式,该功用是完成微量测验的关键技能。即,用微量移液枪吸取样品滴加在检测基座上,基座上包埋了一根承受光纤,放下检测臂与液体触摸,检测臂上有检测光纤,使用液体的表面张力在检测基座和检测臂之间主动构成规范液柱。液柱高度相当于光程,液柱高度可设定为 0.05 nm、0.1 nm、0.5 nm 等。光源宣布的光 经过光纤传导并经过液柱由检测器承受并进行一系列的计算。其过程如图 1~3 所示。 构成规范液柱 与一般的分光光度计相比,从点样到测验完成的时间大大缩短,且省去了清洗比色皿的程序。该检测基座只需用拭镜纸擦拭即可。该类仪器能够完成的检测功用如下:一般的紫外 - 可见分光光度计检测、DNA/RNA 浓度检测、蛋白质浓度检测等。  微量分光光度计的校准方法剖析 经过查阅资料,现有的微量分光光度计普遍具有的技能参数,如表 1 所示。 与一般的分光光度计比较,一些根本的技能 国内统一刊号 CN31-1424/TB2017/6 总第263期 参数还是比较共同的。可是该类仪器预设了 DNA、RNA、蛋白质、荧光染料吸光度值与浓度的对应关系,所以能够直接给出这些样品的浓度值。根据以上技能参数及测验原理,对微量分光光度计的校准就有两种思路, 一是从分光光度计的原理参照一般分光光度计的检定规程 JJG 178-2007《紫外、可见、近红外分光光度计》来校准,另一种思路是从该类仪器的测量成果下手,以浓度规范物质来校准其测量值的示值误差等。下面对两种思路做剖析对比,并给出合理建议。 2.1 以滤光液规范物质进行校准 该方法能够参照 JJG 178-2007 进行部分项目的校准。可将波长准确性、波长重复性、吸光度准确性、杂散光等仪器首要关键的技能指标列为校准项目。对波长准确性和波长重复性的校准能够运用现有的氧化钬波长溶液规范物质,该规范溶液在波长240 ~ 650 nm 规模有 10 个以上尖锐、峰位清晰的吸收峰。吸光度的准确性能够运用 JJG 178-2007 给出的方法,制造一定浓度的重铬酸钾高氯酸溶液或重铬酸钾硫酸溶液,用高精度的紫外可见风景光度计定值其在 235 nm、我们提供最优质的服务态度,服务流程、服务优势业务咨询电话023-63946584/17783682878


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